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猪流行性腹泻病毒锁核酸探针荧光定量 PCR检测方法的建立
- 李艳,卞志标,翟少伦,李春玲
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2024, 49(2):
30-36.
DOI: 10.19978/j.cnki.xmsy.2024.02.05
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摘要
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计量指标
为建立一种快速、灵敏的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)早期痕量检测方法,该研究以 PEDV 的 M 基因为靶基因,设计了特异性引物和锁核酸(LockedNucleic Acid,LNA)?TaqMan 探针,经过条件优化,建立了基于 LNA?TaqMan 探针的 PEDV 荧光定量 PCR 方法,并与常规 TaqMan 探针法进行了比对。结果显示,所建立的 PEDV 的 LNA?Taq?Man 探针荧光定量 PCR 方法最低检测限为 3.2 拷贝/微升,较常规 TaqMan 探针法提高了 10 倍;与猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒和猪德尔塔冠状病毒等多种病原不存在交叉反应,特异性良好;批内和批间重复性结果的变异系数均小于 1%,重复性较好。应用该方法对 103 份临床样品进行检测,结果显示,共检出 PEDV 阳性样品 47 份,阳性率 45.63%,与常规 TaqMan 探针法检测结果的阳性符合率为 90.38%。本研究建立的基于 LNA?TaqMan 探针的荧光定量 PCR 方法为 PEDV 的精准检测和流行病学调查提供了一种新的技术选择。